ماهنامه علمی پ‍ژوهشی

مقدمه: پروتئین‌های غیرفعال‌کننده گیاهی (RIP) به عنوان آنزیم‌های N-glycosidase عمل می‌کنند و به وسیله چندین عضو از خانواده Caryophyllaceae مانند Saponaria Officinalis تولید می‌شوند. ایزوفرم‌های مختلفی از RIPها به وسیلهSaponaria Officinalis بیان می‌شوند. ایزوفرم SO6، آدنین 4324 را در توالی حفاظت‌شده GAGA در چهار لوپ 28SrRNA را دپورینه کرده و سنتز پروتئین را مختل می‌کند. هدف این مطالعه بیان ایزوفرم SO6 در باکتری E.coli و بررسی تیترآنتی‌بادی آن در رت‌های آزمایشگاهی است.

روش بررسی: در این مطالعه تجربی ژن SO6 سنتز شده از پلاسمید pUC57-SO6 نوترکیب به وسیله آنزیم‌های محدود کننده BamHI و SalI جدا و در وکتور بیانی pET28a(+) زیرهمسانه‌سازی شد. بیان پروتئین نوترکیب با IPTG القا گردید. پروتئین SO6 نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص گردید. به منظور تایید پروتئین نوترکیب western blotting انجام گرفت. رَت‌ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده واکسینه شدند و تیتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت.

نتایج: واکنش PCR و هضم آنزیمی، زیرهمسانه‌سازی ژن SO6 را در وکتور بیانی pET28a(+) تائید کرد. یک باند پروتئینی 29.5kDa در SDS-PAGE بیان بالای پروتئین نوترکیب را نشان داد. آنتی‌بادی پلی کلونال، SO6 را شناسایی کرد. تست ELISA تیتر آنتی‌بادی قابل‌توجهی را بعد از تزریق پروتئین در گروه‌های تست در مقایسه با گروه‌های کنترل تائید کرد.

نتیجه‌گیری: از آنجایی که آنتی‌ژن SO6 نوترکیب تخلیص شده ایمونوژن است، این آنتی‌ژن می‌تواند برای تحقیقات ضد سرطانی و کاندید واکسن استفاده شود.