The Journal of Shahid Sadoughi University of Medical Sciences
مجله علمي پژوهشي دانشگاه علوم پزشكي شهید صدوقی يزد
JSSU
Medical Sciences
http://jssu.ssu.ac.ir
20
journal20
2228-5741
2228-5733
fa
jalali
1385
1
1
gregorian
2006
4
1
14
1
online
1
fulltext
fa
تمایز بنیاختههای جنینی انسان به سلولهای مولد انسولین
Differentiation of human embryonic stem cells into insulin- secreting cells
عمومى
General
پژوهشي
Original article
مقدمه: دیابت نوع I، بیماری خود ایمنی می باشد که در نتیجه تخریب سلولهای بتای مولد انسولین ایجاد می شود. از جمله روش های بالقوه درمانی جدید برای درمان این بیماری استفاده از بن یاخته های جنینی انسانی و تمایز آنها به سمت سلولهای مولد انسولین است.
روش بررسی: در این مطالعه از بنیاختههای جنین انسانی (رویانH1 ) استفاده شد. با استفاده از روش تمایز مستقیمبنیاختههای جنینی بعد از تشکیل اجسام شبه جنینی به سمت سلولهای مولد انسولین متمایز شدند به دنبال آن با استفادهاز محیط کشت انتخابی، سلولهای بیان کننده نستین انتخاب شدند. در مرحله نهایی نیز ابتدا با استفاده از فاکتور رشد فیبروبلاستی (bFGF) سلولهای مذکور تکثیر و بعد با افزودن نیکوتین آمید القای تمایز به سوی سلولهای مولد انسولینانجام شد. سلولهای حاصل مورد ارزیابی ایمونوسیتوشیمی، RT-PCR، سنجش میزان ترشح انسولین با استفاده ازرادیوایمونواسی و میکروسکوپ الکترونی گذاره (TEM) قرار گرفتند، در مرحله انتهایی سلولهای تمایز یافته نهایی به منظور ارزیابی پیوند زیر پوست موش تزریق گردید.
نتایج: ارزیابی ایمونوسیتوشیمی سلولهای تمایز یافته وجود سلولهای بیان کننده انسولین، گلوکاگون، سوماتوستاتین وپلیپپتید پانکراسی را نشان داد. در ضمن RT-PCR سلولها، تجلی ژنهای بخش اندوکرینی پانکراس را در مرحله نهاییتمایز مشخص نمود. با افزودن گلوکز به محیط کشت، انسولین از سلولهای تمایز یافته رها شد. البته با افزایش غلظت گلوکز، میزان رهایش انسولین بیشتر نشد. سلولها در ناحیه تزریق رگهای خونیتشکیل دادند در مقطع بافت انسولین مثبت مشاهده شد فراساختار سلولهای متمایز شده اند دستگاه گلژی، در شبکه آندوپلاسمی دانه دار و گرانولهای متعدد را نشان داد ولی ظاهر گرانولها مشابه گرانولهای سلولهای بتا نبود.
نتیجهگیری: نتایج این مطالعه نشان داد که امکان تمایز بن یاختههای جنینی انسانی به سلولهای مولد انسولین وجود دارد ولی به مطالعات بیشتری برای تولید سلولی بتای حقیقی نیاز است.
Introduction: Type I diabetes mellitus is caused by autoimmune destruction of the insulin-producing β-cells. A new potential method for curing the disease is transplantation of differentiated insulin- secreting cells from human embryonic stem cells.
Methods: Human embryonic stem cell lines (Royan H1) were used to produce embryoid bodies. Differentiation carried out by growth factor-mediated selection of nestin positive cells.
In final stage, these cells were expanded in the presence of bFGF, followed by addition of nicotinamide to promote differentiation of insulin- secreting cells.
Cells were assayed by immunocytochemistry, RT-PCR, insulin secreting assay with Radio-immuno assay kit and Transmission Electron Microscopy. The cells were transplanted into immunosuppressed mice.
Results: Analysis of differentiation cells immunocytochemistry showed that these cells were insulin, glucagon, somatostatin and pancreatic polypeptide positive. RT-PCR reaction demonstrated the expression of pancreatic endocrine genes. Differentiation cells secreted insulin in response to glucose, but no significance difference in insulin concentration was observed with an increase in concentration of glucose. The implanted cells were vascularized and remained immunoreactive with insulin and glucagon.
Transmission Electron microscopy of differentiate cells showed Golgi complexes, rough endoplasmic reticulum and a few granules but no true β granules.
Conclusion: The data showed that human embryonic stem cells can produce insulin secreting cells. However, more studies are needed to generate true beta cells.
Differentiation, Human embryonic stem cell, Insulin-secreting cells.
47
58
http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-698&slc_lang=fa&sid=1
H
Baharvand
حسین
بهاروند
. Baharvand50@yahoo.com