fa تولید پروتئین محلول c-CfTXB عروس‌دریایی Chironex fleckeri متصل به تگ سامو در اشریشیاکلی Bl21(DE3) و بررسی ایمنی‌زایی آن در موش سوری زیست شناسی Biology پژوهشي Original article <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:10pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="line-height:107%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:107%"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:black">مقدمه: عروس‌دریایی Chironex fleckeri از گونه‌های تولیدکننده توکسین‌های پروتئینی است که اثرات سایتوتوکسیک و نوروتوکسیک آن‌ها بر موجودات زنده به اثبات رسیده است. به علت حضور انواع پروتئین‌های فعال زیستی در توکسین این جاندار، فلج موقت یا حتی مرگ در شرایط حاد مشاهده شده است. هدف از این مطالعه، محلول‌سازی و بررسی ایمنی‌زایی پروتئین مهندسی‌شده c-CfTXB&nbsp; متصل به تگ سامو به‌عنوان یک آنتی‌ژن نوترکیب و مقایسه پاسخ ایمنی آن با فرم بدون تگ در مدل حیوانی بود.<br> روش بررسی: در این مطالعه تجربی هضم آنزیمی برای برش قطعه ژنی StXB از وکتور pET-28aSUMO-c-CfTXB-StXB&nbsp; انجام شد. سپس بیان پروتئین‌های نوترکیبSUMO-c-CfTXB وc-CfTXB در میزبان پروکاریوتی مستعد با القاء IPTG انجام و پس از آن به کمک ستون کروماتوگرافی Ni-NTA خالص‌سازی گردید. وسترن‌بلاتینگ جهت تایید پروتئین‌ها انجام پذیرفت. پس از ایمن‌سازی گروه‌های موشی، تیتر آنتی‌بادی با روش الایزا و قابلیت حفاظتی واکسن با چالش توکسین ارزیابی گردید. داده‌ها از نرم‌افزار SPSS version 16 با و با آزمون ANOVA یک‌طرفه و تحلیل بقا پردازش شدند.<br> نتایج: طی بیان و جداسازی موفق پروتئین‌ها با SDS-PAGE، مشخص شد که تگ سامو باعث محلول شدن پروتئین هدف گردیده است. در آزمون چالش و مقابله با توکسین، تنها گروه‌های واکسینه‌شده به سبب ایجاد اختلاف معنی‌دار در میزان آنتی‌بادی تولیدشده، بقاء 100%خود را حفظ کردند.<br> نتیجه‌گیری: اتصال تگ SUMO به پروتئین مهندسی‌شده c-CfTXB باعث بهبود تاخوردگی پروتئین هدف و نهایتا بهبود بیان، میزان تخلیص و سهولت آن گردید. این نتایج می‌تواند در طراحی واکسن‌های نوترکیب برای مقابله با زهر عروس‌های دریایی با توجه به ایمنی‌زایی موفق آنتی‌ژن در مدل موشی، مؤثر باشد.</span></span></span></span></span></span></span></span></span></div> <table class="MsoTableGrid" height="388" style="border-collapse: collapse; border: medium;" width="916"> <tbody> <tr> <td style="width:616px; padding:0cm 7px 0cm 7px" valign="top"><span style="font-size:10pt"><span style="line-height:normal"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b>Introduction:</b> The box jellyfish Chironex fleckeri is a toxin-producing species whose cytotoxic and neurotoxic effects have been well demonstrated in living organisms. Due to the presence of various bioactive proteins within its toxin, acute exposure can lead to temporary paralysis or even death under severe conditions. This study aimed to solubilize and evaluate the immunogenicity of the engineered SUMO-tagged recombinant c-CfTXB protein as an antigen, by comparing its immune response to the untagged form in animal model.</span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="line-height:normal"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b>Methods:</b> The StXB gene fragment was excised from the pET-28aSUMO-c-CfTXB-StXB vector using enzymatic digestion. Subsequently, the recombinant proteins SUMO-c-CfTXB and c-CfTXB were expressed in competent prokaryotic hosts following IPTG induction, and purified through Ni-NTA affinity chromatography. Protein identity was confirmed by Western blot analysis. Following immunization of mouse groups, antibody titers were measured using indirect ELISA, and protective efficacy was evaluated through a toxin challenge. Data analysis was performed using One-way ANOVA combined with survival analysis.</span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="line-height:normal"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b>Results:</b><b> </b>Successful protein expression and separation were confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis, demonstrating that the SUMO tag enhanced the solubility of the target protein. In the toxin challenge test, only the vaccinated groups survived (100%) due to a significant increase in antibody titers (Pvalue c-CfTXB&rsaquo;0.0001 and Pvalue SUMO-c-CfTXB&rsaquo;0.0003).&nbsp;</span></span></span><br> <b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:107%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Conclusion:</span></span></span> </b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:107%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Fusion of the SUMO tag to the engineered c-CfTXB protein improved its folding, expression yield, purification efficiency, and solubility. These findings suggest that the successful immunogenicity of the antigen in the mouse model may pave the way for the design of recombinant vaccines to neutralize box jellyfish venom</span></span></span></td> </tr> </tbody> </table> تگ سامو, پروتئین محلول, پروتئین CfTXB, عروس‌دریایی, کایرونکس فلکری CfTXB, Chironex fleckeri, Jellyfish, Soluble protein, SUMO. 10163 10176 http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5564-1&slc_lang=fa&sid=1 Mehdi Bakhshian مهدی بخشیان bakhshian4444mehdi@gmail.com 0009-0007-7226-0863 No School of Basic Sciences, Imam Hossein comprehensive university دانشگاه جامع امام حسین(ع) Hossein Honari حسین هنری hhonari@ihu.ac.ir 0000-0002-9416-3104 Yes Imam Hossein comprehensive university دانشگاه جامع امام حسین(ع) Hossein Samiei Abianeh حسین سمیعی ابیانه Hosseinjanm18@gmail.com 0000-0002-7743-9594 No Imam Hossein comprehensive university دانشگاه جامع امام حسین(ع) Seyed Mojtaba Aghaie ُسید مجتبی آقایی kbmaghee@ihu.ac.ir 0000-0003-0201-9592 No Imam Hossein comprehensive university دانشگاه جامع امام حسین(ع)