fa تقویت اثر داروی شیمی‌درمانی 5-فلورویوراسیل توسط توکسین منفذساز فراگاسئاتوکسین C در رده‌‌‌سلولی سرطان پستان MCF-7 سایر other پژوهشي Original article <strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="font-family:b nazanin;">مقدمه:</span></span></strong> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">شیمی‌درمانی به‌دلیل عوارض جانبی دوز بالای استفاده در درمان بسیاری از بیماری‌ها با محدودیت‌های زیادی مواجه است. در این تحقیق با استفاده از توکسین منفذساز فراگاسئاتوکسین </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">C</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> (</span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">FraC</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">) که به‌ صورت نوترکیب در باکتری تولید شده است، تسهیل ورود داروی شیمی‌درمانی 5-فلورویوراسیل بر رده‌سلولی سرطان پستان </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">MCF-7</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> مورد بررسی قرار گرفته است.</span></span></span><br> <strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="font-family:b nazanin;">روش بررسی:</span></span></strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="font-family:b nazanin;"> در این مطالعه تجربی، </span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">پس از تهیه ژن توکسین </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">FraC</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> از منبع تجاری، ژن با استفاده از آنزیم‌های محدود کننده </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">NcoI</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> و </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">XhoI</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">، وارد وکتور بیانی </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">pET28a</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> شد. بیان توکسین در باکتری اشریشیا کلی به‌وسیله </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IPTG</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> القا شد و توکسین به‌وسیله روش کروماتوگرافی میل ترکیبی </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">Ni-NTA</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> تخلیص شد. پس از بررسی فعالیت همولیز توکسین به‌وسیله روش توربیدومتری، اثرات سیتوتوکسیک و تقویت اثر داروی 5-فلورویوراسیل به‌وسیله سنجش تریپان‌‌بلو و تست </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">MTT</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> مورد ارزیابی قرار گرفت.</span></span></span> <span style="font-family:b nazanin;">تحلیل </span><span style="font-family:b nazanin;">داده‌ها </span><span style="font-family:b nazanin;">به‌وسیله تست </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">T-student</span></span><span style="font-family:b nazanin;"> و نرم‌افزار </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">SPSS Inc Vession v16</span></span> <span style="font-family:b nazanin;">در سطح معنی‌داری پنج درصد انجام شد.</span><br> <strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="font-family:b nazanin;">نتایج:</span></span></strong> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">توکسین </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">FraC</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> در باکتری اشریشیا کلی به ‌صورت نوترکیب تولید شده و به‌صورت خالص با خلوص نسبی حدود 86 درصد تهیه شد. اثرات سیتوتوکسیک این توکسین بر روی رده‌سلولی </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">MCF-7</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> وابسته به دوز و زمان تیمار است. مقدار</span></span></span> <span dir="LTR" style="letter-spacing:.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IC₅₀</span></span></span><span style="letter-spacing:.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> برای توکسین برابر 3/3 میکروگرم بر میلی‌لیتر محاسبه شد. </span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">در دوزهای غیرکشنده، این توکسین باعث تقویت اثر 4 تا 6 برابری داروی شیمی‌درمانی 5-فلورویوراسیل در زمان‌های مختلف ( 24 تا 72 ساعت) می‌شود.</span></span></span><br> <strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="font-family:b nazanin;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">تقویت اثر داروی شیمی‌درمانی 5-فلورویوراسیل با تسهیل ورود این دارو به سلول‌های سرطان پستان </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">MCF-7</span></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">توسط توکسین منفذساز </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">FraC</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> می‌تواند از عوارض شیمی‌درمانی این دارو بکاهد. </span></span></span><br> &nbsp; <strong>Introduction:</strong> Chemotherapy has been restricted due to the high-dose side effects. In the present study, acceleration of the chemotherapeutic drug (5FU) entrance into MCF-7 cells has been explored by using a recombinant form of Fragaceatoxin C (FraC) pore-forming toxin.<br> <strong>Methods:</strong> In this experimental study, the gene for FraC toxin was order from a commercial source and was sub-cloned into pET28a vector using NcoI and XhoI restriction enzymes. Expression of the protein was induced by IPTG and purification was performed using Ni-NTA affinity chromatography. Hemolysis was tested using a turbidimetric assay. Cytotoxic and potentiation effects of the recombinant toxin on 5FU chemotherapeutic drug were analyzed using trypan blue and MTT assays. T-student test was used to analyze the data using the SPSS v16 software. Significance was defined as P&le;0.05<br> <strong>Results:</strong> Recombinant FraC toxin was produced in <em>E. coli</em> with 86% purity. Cytotoxic effects of the FraC toxin in MCF-7 cells were dose and time-dependent. the IC50 of FraC toxin on MCF-7 cells was 3.3 mg/ml. Non-toxic concentrations of recombinant FraC toxin enhanced cytotoxic effects of 5FU by a factor of 4 to 6 in different exposure times (24-72 h).<br> <strong>Conclusion:</strong> Potentiation of the 5FU chemotherapeutic effect by acceleration of its entrance into cancer target cells using FraC pore-forming toxin can reduce its side effects of the chemotherapy.<br> &nbsp; توکسین منفذساز, پروتئین نوترکیب, فراگاسئاتوکسین C, سرطان پستان Pore-forming toxin, Recombinant protein, Fragaceatoxin C, Breast cancer 1735 1746 http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3885-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Hassan Kheirandish محمدحسن خیراندیش bio71.mohammad@yahoo.com 0000-0003-1998-2609 No Protein Engineering Laboratory, Department of Medical Genetics, Faculty of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences آزمایشگاه مهندسی پروتئین، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی خدمات بهداشتی درمانی شهید صدوقی Hossein Zarei Jaliani حسین زارعی جلیانی zarei.j@gmail.com 0000-0002-6324-3785 Yes Biotechnology Research Center, International Campus, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, مرکز تحقیقات زیست‌فناوری، پردیس بین الملل، دانشگاه علوم پزشکی خدمات بهداشتی درمانی شهید صدوقی Mehdi Imani مهدی ایمانی m.imani@urmia.ac.ir 0000-0002-9990-4389 No Department of Biochemistry, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University گروه بیوشیمی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه