The Journal of Shahid Sadoughi University of Medical Sciences
مجله علمي پژوهشي دانشگاه علوم پزشكي شهید صدوقی يزد
JSSU
Medical Sciences
http://jssu.ssu.ac.ir
20
journal20
2228-5741
2228-5733
fa
jalali
1397
10
1
gregorian
2019
1
1
26
10
online
1
fulltext
fa
مقایسه اثر ایمنی زایی پروتئین های نوترکیبEIT و Stx2B متصل به نانو ذرات بر پایه کیتوزان در مدل حیوانی به عنوان کاندیدای نانوواکسن بر علیه E. coli O157:H7
Comparison of immunization potential from recombinant proteins EIT and Stx2B nanoparticulated based on chitosan in animal model, as nanovaccin candidate against E. coli O157:H7
سایر
other
پژوهشي
Original article
<div style="text-align: justify;"><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">مقدمه:</span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> باکتری </span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">E. coli </span></span></span></em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">O157:H7 </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> پاتوژن مشترک بین انسان و دام و ایجاد</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">کننده سندرم اورمی همولیتیک</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> (HUS) </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> و اسهال حاد در انسان می</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">باشد که به</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">دلیل قابلیت لانهگزینی سریع در دستگاه گوارش انسان حائز اهمیت است.</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">یکی از</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">راه</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">کارهای مقابله و پیشگیری در برابر</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">این بیماری</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">ها بکارگیری نانوواکسن</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">های حاصل از آنتی ژن های نوترکیب فاکتورهای بیماری</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">زای این باکتری می</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">باشد. دراین تحقیق پروتئین</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">های نوترکیب </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">EIT</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">(EspA, Intimin, Tir)</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">Stx2B</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> با نانو ذرات کیتوزان انکپسوله ودردو گروه </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">EIT</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> همراه </span></span> <span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">Stx2B</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">و بدون آن به موش های</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> BALB/c</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">تلقیح شدندومیزان ایمنی</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">زایی ارزیابی و مقایسه شد .</span></span><br>
<strong><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">روش بررسی:</span></span></span></strong> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">در این مطالعه تجربی پروتئین</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">های نوترکیب</span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> EIT </span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">و </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> Stx2B</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> پس از بیان و خالص</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">سازی با روش ستون نیکل و تأیید با وسترن بلاتینگ، با نانو ذرات کیتوزان به روش ژلاسیون یونی</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">نانوپارتیکله شدند. پس از واکسیناسیون آنتی</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">بادی</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">های سرمی و مدفوعی ضد</span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">rEIT </span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> و</span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> rStx2B</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> با استفاده از الایزا ارزیابی و مقایسه شد.</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">چالش ریزش مدفوعی باکتری</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> با نرم افزار </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> Excel</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> و میزان محافظت موش</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">ها بر علیه سم این باکتری </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">بر</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">اساس</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">تست</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">دقیق</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">فیشر</span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> مورد آزمایش قرار گرفت.</span></span></span><br>
<strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">نتایج:</span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> میزان </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IgG</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> سرمی و</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> IgA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">سرمی و مدفوعی موش</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">ها اندازه</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">گیری و مقایسه شد. ایمنی مطلوب تری در گروه های واکسینه شده خوراکی-</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">تزریقی با مخلوط دو آنتی</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">ژن نانوپارتیکله به دست آمد. محافظت حیوانی در برابر سم فقط در گروه</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">های واکسینه </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">rEIT</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">همراه</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">با</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">rStx2B </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> مشهود بود. سطح اختلاف معنی دار بین این گروه</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">ها و کنترل مشهود بود (05/0 </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">P<</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">).</span></span><br>
<strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">نتیجهگیری:</span></span></strong> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">شواهد نشان می</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">دهد از پروتئین نوترکیب </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">rEIT</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> همراه با</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> rStx2B </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"> متصل به نانو</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">ذرات کیتوزان می</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">تواند مقابله مؤثرتری از طریق جلوگیری از اتصال باکتری و خنثی</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;">سازی سم حاصل از آن داشته باشد.</span></span></div>
<div style="text-align: justify;"><strong>Introdution:</strong> <em>E. coli </em>O157:H7 with its ability of quick implantation inside gastrointestinal tract that causes hemolytic uremic and bloody diarrhea in humans is an important subject to investigate. One of the effective ways to prevent these infections is using nanovaccines prepared from immunogenic recombinant protein from bacterial virulence factors. In this research, the chitosan encapsulated by recombinant protein of EIT with and without Stx2B were introduced to BALB/c mice and immunogenicity was evaluated and compared.<br>
<strong>Methods:</strong> In this experimental study the recombinant protein of EIT and Stx2B were nanoparticulated with chitosan through ionic gelation method after expression and purification with Ni-NTA column and approval by Western blotting. After Vaccinations antibodies against rStx2B and rEIT in the mice’s serum and feces were detected by ELISA. Challenge test for neutralization and protection against Stx2 toxin was applied with immunized serum by Fisher's exact test.<br>
<strong>Results:</strong> Evaluation of IgA and IgG antibody levels in the mice’s serum and also the IgA level in their feces showed more appropriate immunity oral-injection groups with the both nanoparticulated antigens. The protection challenge study show that, the mice group which received rEIT+ rStx2B could neutralize the toxin activity significant difference (<em>P</em><0.05) between test and control groups of mice was recorded.<br>
<strong>Conclusion: </strong>The data indicate these multiple vaccine candidates with both nanoparticulated recombinant proteins EIT and Stx2B with chitosan, provide more effective protection against of <em>E. coli </em>O157:H7</div>
پروتئین نوترکیب, کیتوزان, نانوواکسن, ایمنیزایی,E. coli O157:H7
Recombinant protein, Chitosan, Nanovaccin, Immunization, E. coli O157:H7.
832
844
http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3828-1&slc_lang=fa&sid=1
Jaleh
Khanifar
ژاله
خنیفر
jal.khanifar@yahoo.com