The Journal of Shahid Sadoughi University of Medical Sciences
مجله علمي پژوهشي دانشگاه علوم پزشكي شهید صدوقی يزد
JSSU
Medical Sciences
http://jssu.ssu.ac.ir
20
journal20
2228-5741
2228-5733
fa
jalali
1397
1
1
gregorian
2018
4
1
26
1
online
1
fulltext
fa
جذب سلولی miRNA-101 و ارزیابی تأثیر آن بر القای سمیت سلولی و بیانیوبی کوئیتین لیگاز HECTH9 در سلولهای لوسمی میلوئیدی حاد (AML)
MiRNA -101 transfection and its effect on the cytotoxicity induction and expression of ubiquitin ligase HECTH9 in acute myeloid leukemia cells (AML)
ژنتیک
Genetics
پژوهشي
Original article
<strong><span style="color:#006386;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">مقدمه:</span></span></span></strong> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">در پژوهش حاضر از لیپوفکتامین 2000 به عنوان لیپوزوم کاتیونی جهت ترانسفکشن </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">miR-101</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> به منظور بررسی سمیت سلولی آن و تاثیرش بر بیان یوبی کوئیتین لیگاز </span></span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">HECTH9</span></span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در سلولهای لوسمی میلوئیدی حاد (</span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">AML</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">) </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">استفاده شد.</span></span></span><br>
<strong><span style="color:#006386;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">روش بررسی:</span></span></span></strong> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">برای انجام این مطالعه با استفاده از لیپوزوم کاتیونی لیپوفکتامین 2000 به عنوان نانو حامل، </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">miR-101</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> به درون سلول</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">های </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">KG-1</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> (سلول</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">های میلوئیدی) و </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">HBMF-SPH</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> (سلولهای مغز استخوان سالم) انتقال یافت. سپس با استفاده از تست </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">MTT</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> سمیت سلولی 48 ساعته در هر دو رده سلولی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس اثر این </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">miRNA</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> بر میزان بیان ژن </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">HECTH9</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> (یوبی کوئیتین لیگاز </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">E3</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">) با استفاده از تکنیک </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">qRT-PCR</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> ارزیابی گردید.</span></span></span><br>
<strong><span style="color:#006386;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">نتایج:</span></span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> یافته­های این مطالعه نشان دادند که لیپوفکتامین به تنهایی برای هیچ</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">یک از رده­های سلولی سمیت نداشت اما لیپوفکتامین حامل </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">miR-101</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> (</span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Lipo/miR-101</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">) در سلول</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">های </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">KG-1</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> بیشترین سمیت را نسبت به سایر تیمارها ایجاد کردند. نتایج حاصل از انجام تست </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">qRT-PCR</span></span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">نشان داد که تیمار </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Lipo/miR-101</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در سلول</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">های </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">KG-1</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> سبب بیشترین افزایش بیان در ژن </span></span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">HECTH9</span></span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در سطح </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">mRNA</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> شد. </span></span></span><br>
<strong><span style="color:#006386;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجهگیری:</span></span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> لیپوفکتامین به عنوان یک لیپوزوم کاتیونی می­تواند به طور موثری ترانسفکشن </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">miR-101</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> را به درون سلول</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">ها انجام دهد و می­تواند سبب شود که </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">miR-101</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> به طور بارزی اثرات ضد توموری خود را با افزایش بیان </span></span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">HECTH9</span></span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و تنظیم واسطه­های مسیر آپوپتوز میتوکندریایی اعمال نماید. بنابراین </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">miR-101</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> می­تواند به عنوان یک مهار کننده تومور توانمند و یک عامل درمانی موثر جهت ژن درمانی در مبتلایان به </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">AML</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> مورد استفاده واقع شود. </span></span></span>
<strong>Introdution</strong><strong>:</strong> In the present study, Lipofactamine 2000 was used as a cationic liposome for miR-101 transfection in order to investigate its cytotoxicity and its effect on the expression of ubiquitin ligase HECTH9 in acute myeloid leukemia cells (AML).<br>
<strong>Methods:</strong> MiR- 101 was transferred to KG-1 cells (myeloid cells) and HBMF-SPH (healthy bone marrow cells) using lipofectamine 2000 as a nano carrier. Then, using the MTT test, the 48-hour cell toxicity in both cell lines was evaluated. The effect of this miRNA on the expression of HECTH9 gene (ubiquitin Ligaase E3) was evaluated using qRT-PCR technique.<br>
<strong>Results:</strong> The findings of this study showed that Lipofactamine alone was not toxic to any of the cell lines, but lipofectamine-containing miR-101 (Lipo / miR-101) in KG-1 cells produced the highest toxicity compared to other treatments. The results of qRT-PCR test showed that Lipo / miR-101 treatment in KG-1 cells caused the highest expression in HECTH9 gene at the mRNA level.<br>
<br>
<strong>Conclusion</strong><strong>:</strong> Lipofactamine, as a cationic liposome, can effectively transfect miR-101 into the cells and can cause miR-101 to specifically display its antitumor effect by increasing the expression of HECTH9 and regulating pathways of mitochondrial apoptotic pathway. Therefore, miR-101 can be used as a potent tumor suppressor and an effective therapeutic agent for gene therapy in the patients with AML.
لیپوفکتامین 2000, miR-101, HECTH9, ژن درمانی, AML
lipofectamine 2000, miR-101, HECTH9, gene therapy, AML
64
76
http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3360-2&slc_lang=fa&sid=1
Narges
Nikoonahad Lotfabadi
نرگس
نیکونهاد لطف آبادی
nikounahad_1976@yahoo.com