fa ایجاد سازواره ژنی برای دست‌کاری ژنتیکی سالمونلا انتریتیدیس در محل اختصاصی ژن sipC زیست شناسی Biology پژوهشي Original article <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مقدمه:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بیماری </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">سالمونلوز بر اثر مصرف مواد غذایی آلوده به سالمونلا</span> در انسان و حیوانات ایجاد می‌شود. سالمونلا</span>، توان ایجاد عفونت خود را به واسطه داشتن ژن‌های بیماری‌زایی متعدد کسب کرده است. ژن <em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">sipC</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> یکی از </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">ژن‌های بیماری‌زایی سالمونلا</span> است که پروتئین </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">SipC</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> را کد می‌کند.</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">هدف از این پژوهش ایجاد یک کاست ژنی به منظور دست‌کاری ژنتیکی سالمونلا</span> انتریتیدیس در محل ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">sipC</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> هست.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">روش بررسی:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">در این مطالعه تجربی، پس از استخراج </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">DNA</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> از سالمونلا</span>، نواحی فرادست (</span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">up</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">) و فرودست (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">down</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">) ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">sipC</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> به روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، تکثیرو محصولات </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> به روش همسانه‌سازی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">T/A</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در وکتور </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pGEM</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> درج شدند. به منظور ایجاد سازواره نهایی، هر یک از قطعات نواحی فرادست و فرودست ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">sipC</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> به ترتیب در وکتور </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pET32</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> ساب کلون گردیدند و صحت کلونینگ با روش‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و هضم آنزیمی بررسی شد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">تکثیر نواحی 320 جفت بازی فرادست و 206 جفت بازی فرودست ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">sipC</span></span></span></em> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">با روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> با موفقیت انجام شد. همسانه‌سازی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">T/A</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> این قطعات، سبب تشکیل دو وکتور نوترکیب </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pGEM-up</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pGEM-down</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> شد. نتایج تایید صحت ساب کلونینگ، موید تشکیل کاست ژنی نهایی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pET32-up-down</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> است.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">کاست ژنی ساخته شده در این مطالعه به عنوان یک کاست چند منظوره قادر به دست‌کاری اختصاصی ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">sipC</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> سالمونلا</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> به روش نوترکیبی همسان است. این سازواره ژنی از پتانسیل لازم برای حذف ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">sipC</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و یا درج هر ژن مفید و مؤثری به جای ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">sipC</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، برخوردار است.</span></span></p> <p style="text-align: justify;"><strong>Introduction:</strong> Salmonellosis is an infection caused by eating contaminated food with Salmonella, and it can occur in humans and other animals. Salmonella has acquired the ability to create the infection due to the presence of several virulence genes. One of the virulence genes of salmonella is sipC gene that coding the SipC protein. The aim of this study was creating the gene cassette to genetically engineered Salmonella enteritidis in the specific region of the sipC gene.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Methods:</strong> In this study, after DNA extraction from Salmonella, the upstream and downstream regions of the sipC gene was amplified based on PCR method. The PCR products were cloned with T/A cloning method and they were inserted into the pGEM vector. In order to generate the final gene cassette, each of the upstream and downstream regions of the sipC gene was subcloned into the pET32 vector, and cloning accuracy was assessed by PCR and enzyme digestion methods.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Results:</strong> Amplification of the 320 bp upstream and 206 bp downstream of sipC gene was successful by PCR method. T/A cloning of these fragments were caused the formation of two pGEM-up and pGEM-down recombinant vectors. Results that were confirmed the sub-cloning accuracy indicate the formation of the final pET32-up-down gene cassette.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Conclusion:</strong> The generated gene cassette in this study was considered as a multi-purpose cassette that is able to specific gene manipulation of Salmonella sipC gene by homologous recombination matched. This gene cassette has the necessary potential for sipC gene deletion or insertion of any useful gene instead of sipC gene.</p> سالمونلا انتریتیدیس, کاست ژنی, ژن sipC Salmonella Enteritidis, Gene Cassette, sipC gene 78 90 http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2971-1&slc_lang=fa&sid=1 M Ghasemi مریم قاسمی maryam.ghasemi1988@gmail.com No Biotechnology Research Center مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد A Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com Yes Biotechnology Research Center مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد