fa بیان کاست ژنی blf1-stxB در باکتری E. coli و بررسی تیترآنتی بادی در موش ژنتیک Genetics پژوهشي Original article <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"><span style="font-size:14px;"><strong><span style="font-family: b nazanin;">مقدمه:</span></strong> <span style="font-family: b nazanin;">یکی از راه‌ های تقویت اثر واکسن‌ها استفاده از یاورها می‌باشد. </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">STxB</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>شیگلا دارای نقش یاوری و حاملی بوده و می‌توان با ممزوج کردن آنتی‌ژن‌های کاندیدای واکسن با این ادجوانت به تولید واکسن مناسب پرداخت. </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">BLF1</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>نقش مهمی در بیماری‌زایی و ایجاد عفونت توسط </span><span style="font-family: b nazanin;">بورخولدریا سودومالئی</span><span style="font-family: b nazanin;"> دارد. هدف این مطالعه، بیان ژن </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">blf1-stxB</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> در باکتری </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">E. coli</span></span> <span style="font-family: b nazanin;">و بررسی تیتر آنتی‌بادی آن در موش است.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"><span style="font-size:14px;"><strong><span style="font-family: b nazanin;">روش بررسی: </span></strong><strong><span style="font-family: b nazanin;">در این مطالعه، </span></strong><span style="font-family: b nazanin;">پلاسمید </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">pUC57</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>حاوی ژن </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">blf1</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>با جایگاه‌های آنزیمی </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">BamHI</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>و </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">SalI</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>در وکتور بیانی </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">pET28a(+)-stxB</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> زیرهمسانه&shy; سازی گردید و به باکتری </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">E. coli</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>سویه </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">BL21(DE3)</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>تراریخت (ترانسفورم) شد. </span><span style="font-family: b nazanin;">بیان</span><span style="font-family: b nazanin;"> کاست</span><span style="font-family: b nazanin;"> ژنی </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">blf1-StxB</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> تحت القای </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">IPTG</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> انجام گردید</span><span style="font-family: b nazanin;">. بعد از تخلیص پروتئین نوترکیب با ستون کروماتوگرافی، چهار نوبت متوالی به موش سوری تزریق شد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"><span style="font-size:14px;"><strong><span style="font-family: b nazanin;">نتایج:</span></strong> <span style="font-family: b nazanin;">در این مطالعه </span><span style="font-family: b nazanin;">ژن </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">blf1-stxB</span></span><span style="font-family: b nazanin;"><span style="font-family:times new roman;"> </span>کلون شده در وکتور بیانی </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">pET28a(+)</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> به وسیله‌ </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">PCR</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> و آنالیز آنزیمی تأیید گردید. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">SDS-PAGE</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> و لکه‌گذاری وسترن تأیید شد. سپس آنتی‌بادی تولید شده از سرم موش جداسازی و توسط تست الایزا تأیید گردید.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"><span style="font-size:14px;"><strong><span style="font-family: b nazanin;">نتیجه‌گیری:</span></strong> <span style="font-family: b nazanin;">با توجه به اینکه پروتئین </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">BLF1</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> توانایی توقف پروتئین&shy;سازی و </span><span style="font-family:times new roman;"><span dir="LTR">STxB</span></span><span style="font-family: b nazanin;"> دارای نقش یاوری &nbsp;است. این پروتئین نوترکیب می‌تواند به عنوان کاندیدای واکسن علیه </span><span style="font-family: b nazanin;">بورخولدریا سودومالئی </span><span style="font-family: b nazanin;">و شیگلا دیسانتری مورد استفاده واقع شود.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0cm;margin-bottom:.0001pt;text-indent:11.35pt;line-height:20.0pt;"></p> <p><strong>Background and Objectives</strong><em><strong>:</strong></em> One of the ways to strengthen the effect of vaccines is using the adjuvant. STxB has a carrier and adjuvant role that we can fuse it with vaccine candidate antigens and produce efficient vaccines. BLF1 has a role in the pathogenesis and infection by <em>Burkholderia pseudomallei</em>, that can be studied when fused with stxB.The aim of this study expression <em>blf1-stxB</em> gene Cassette in <em>E. coli</em> and antibody production in mice.</p> <p><strong>Methods:</strong>In this study the synthetic gene in pUC57 plasmid was purchased from Nedaye Fan COR. pUC57 plasmid containing <em>blf1</em> with <em>Bam</em>HI , <em>Sal</em>I restriction enzyme sites was subcloned in pET28a(+)-<em>stxB</em> expression vector and transformed into <em>E. coli</em> BL21 DE3. expression<em> blf1-stxB</em> gene Cassette was induced by IPTG.&nbsp;After extraction by affinity chromatography, the recombinant protein was injected four times to mice.</p> <p><strong>Results: </strong>In this study, <em>blf1-StxB</em> cloned gene in pET28a(+) expression vector was approved by PCR and enzymatic analysis. Also recombinant protein confirmed by SDS-PAGE and Western blotting. Then antibody produced from the mice serum, were isolated and confirmed by ELISA.</p> <p><strong>Conclusion: </strong>Given that BLF1 protein has the ability to stop protein synthesis and STxB has a carrier and adjuvant role, also with respect to antibody titers produced, it&rsquo;s as a vaccine candidate against <em>B. pseudomallei</em> and <em>Shigella dysenteriae</em>.</p> بورخولدریا سودومالئی, میلوئیدوزیس, شیگلا, فاکتور A 4 شروع کننده رونویسی Burkholderia pseudomallei, Melioidosis, Shigella, eIF4A 876 886 http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2958-1&slc_lang=fa&sid=1 Mehdi Masoudi Kerahroudi مهدی مسعودی کرهرودی mehdi.masoudi.k@gmail.com No دانشگاه جامع امام حسین(ع) Hossien Honari حسین هنری honari.hosein@gmail.com Yes دانشگاه جامع امام حسین(ع) masoud abdollahi مسعود عبدالهی ma.abdollahi102@yahoo.com No دانشگاه جامع امام حسین(ع)