fa زیرهمسانه‌سازی و بیان ژن SO6 گیاه غاسول صابونی در باکتری E.coli و بررسی تیترآنتی‌بادی آن در رَت آزمایشگاهی ژنتیک Genetics پژوهشي Original article <p dir="RTL" style="margin-bottom: 0.0001pt; text-indent: 11.35pt; line-height: 20pt; text-align: justify;"><strong><span style="font-family:b nazanin;">مقدمه:</span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">پروتئین‌های غیرفعال‌کننده گیاهی</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">(</span></span><span dir="LTR">RIP</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">) به عنوان آنزیم‌های </span></span><span dir="LTR">N-glycosidase</span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">عمل می‌کنند و به وسیله چندین عضو از خانواده </span></span><span dir="LTR">Caryophyllaceae</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> مانند </span></span><em><span dir="LTR">Saponaria Officinalis</span></em> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">تولید می‌شوند. ایزوفرم‌های مختلفی از </span></span><span dir="LTR">RIP</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">ها به وسیله</span></span><em><span dir="LTR">Saponaria Officinalis</span></em> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بیان می‌شوند. ایزوفرم </span></span><span dir="LTR">SO6</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، آدنین </span></span><span dir="LTR">4324</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> را در توالی حفاظت‌شده </span></span><span dir="LTR">GAGA</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در چهار لوپ </span></span><span dir="LTR">28SrRNA</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> را دپورینه کرده و سنتز پروتئین را مختل می‌کند. هدف این مطالعه بیان ایزوفرم </span></span><span dir="LTR">SO6</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در باکتری</span></span> <em><span dir="LTR">E.coli</span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بررسی تیترآنتی‌بادی آن در رت‌های آزمایشگاهی است.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom: 0.0001pt; text-indent: 11.35pt; line-height: 20pt; text-align: justify;"><strong><span style="font-family:b nazanin;">روش بررسی:</span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در این مطالعه </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">تجربی ژن </span></span><em><span dir="LTR">SO6</span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> سنتز شده از پلاسمید </span></span><span dir="LTR">pUC57-SO6</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> نوترکیب به وسیله آنزیم‌های محدود کننده </span></span><em><span dir="LTR">Bam</span></em><span dir="LTR">HI</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span><em><span dir="LTR">Sal</span></em><span dir="LTR">I</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> جدا و در وکتور بیانی </span></span><span dir="LTR">pET28a(+)</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> زیرهمسانه‌سازی شد. بیان پروتئین نوترکیب با </span></span><span dir="LTR">IPTG</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> القا گردید. پروتئین </span></span><span dir="LTR">SO6</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص گردید. به منظور تایید پروتئین نوترکیب </span></span><span dir="LTR">western blotting</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> انجام گرفت. رَت‌ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده واکسینه شدند و تیتر </span></span><span dir="LTR">IgG</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> سرم به روش </span></span><span dir="LTR">ELISA</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> مورد سنجش قرار گرفت.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom: 0.0001pt; text-indent: 11.35pt; line-height: 20pt; text-align: justify;"><strong><span style="font-family:b nazanin;">نتایج</span></strong><span dir="LTR">:</span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">واکنش </span></span><span dir="LTR">PCR</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و هضم آنزیمی، زیرهمسانه‌سازی ژن </span></span><em><span dir="LTR">SO6</span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> را در وکتور بیانی </span></span><span dir="LTR">pET28a(+)</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> تائید کرد. یک باند پروتئینی </span></span><span dir="LTR">29.5kDa</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در </span></span><span dir="LTR">SDS-PAGE</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> بیان بالای پروتئین نوترکیب را نشان داد. آنتی‌بادی پلی کلونال، </span></span><span dir="LTR">SO6</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> را شناسایی کرد. تست </span></span><span dir="LTR">ELISA</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> تیتر آنتی‌بادی قابل‌توجهی</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">را بعد از تزریق پروتئین در گروه‌های تست در مقایسه با گروه‌های کنترل تائید کرد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom: 0.0001pt; text-indent: 11.35pt; line-height: 20pt; text-align: justify;"><strong><span style="font-family:b nazanin;">نتیجه‌گیری:</span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">از آنجایی که آنتی‌ژن </span></span><span dir="LTR">SO6</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> نوترکیب تخلیص شده </span></span><span style="background:white;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">ایمونوژن است، این آنتی‌ژن می‌تواند برای تحقیقات ضد سرطانی و کاندید واکسن استفاده شود.</span></span></span></p> <p><strong>Introduction:</strong> Plant ribosome inactivating proteins act as N-glycosidase enzyme and produce by several family of Caryophyllaceae such as <em>Saponaria Officinalis</em>. Different Isoforms of RIPs expressed by <em>Saponaria Officinalis</em>. SO6 isoform depurinate Adenine 4324 in the conserved GAGA loop of 28SrRNA and disrupts protein synthesis. The aim of this study was expression of SO6 isoform in <em>E.coli</em> and investigation of antibody titer in rats.</p> <p><strong>Methods: </strong>In this experimental study, SO6 synthetic gene was excised from recombinant pUC57- SO6 plasmid with <em>Bam</em>HI and <em>Sal</em>I restriction enzymes and subcloned into pET28a (+) expression vector. The expression of recombinant protein was induced by IPTG. Recombinant SO6 was purified by nickel affinity chromatography. Western blotting was performed to confirm the recombinant protein. Rats were immunized intraperitoneal with purified protein and IgG serum titer was assayed by ELISA<span dir="RTL">.</span></p> <p><strong>Results: </strong>PCR reaction and enzyme digestion confirmed subcloning of SO6 gene into pET28a (+) expression vector. A 29.5kDa protein band on SDS-PAGE showed a high level of recombinant protein expression. Polyclonal antibodies recognized SO6. ELISA confirmed significant antibody titer after injection of protein in test group compared with the control group.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> The recombinant purified SO6 antigen can be used for anti-cancer and vaccine candidate research<span dir="RTL">.</span></p> N-glycosidase, غاسول صابونی, غیرفعال‌کننده ریبوزوم, SO6 N-glycosidase, Saponaria Officinalis, RIP, SO6 1024 1033 http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2825-1&slc_lang=fa&sid=1 masoud abdollahi مسعود عبدالهی ma.abdollahi102@yahoo.com No University of Imam Hussein دانشگاه جامع امام حسین(ع) hossein honari حسین هنری honari.hosein@gmail.com Yes University of Imam Hussein دانشگاه جامع امام حسین(ع) shahram nazarian شهرام نظریان nazarian56@gmail.com No University of Imam Hussein دانشگاه جامع امام حسین(ع) mehdi masoudi kerahroudi مهدی مسعودی کرهرودی mehdi.masoudi.k@gmail.com No University of Imam Hussein دانشگاه جامع امام حسین(ع)