fa بررسی کارایی عملکرد آنتی‌ژن‌نوترکیب ROP1 در تشخیص عفونت توکسوپلاسما گوندی ژنتیک Genetics پژوهشي Original article مقدمه:توکسوپلاسمایک انگل داخل سلولی اجباری است که دارای دامنه میزبان وسیعی در میان پستانداران و پرندگان است، پروتئین‌های توکسوپلاسما آنتی‌ژن‌های قوی می‌باشند که قادرند واکنش‌های ایمنی قوی را شروع کنند.یکی از این نوع راپتری پروتئین 1 توکسوپلاسما گوندیی(ROP1) است.ROP1 یکی از رقابت کننده‌های واکسن‌های نوترکیب بر علیه توکسوپلاسما می‌باشد. بنابراین هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان ROP1 در یک کلونینگ وکتور((PUET1 و ساخت این آنتی‌ژن نوترکیب برای استفاده‌های بعدی است. روش بررسی:پس از استخراج DNA و تکثیر با روش PCR محصول در کلونینگ وکتورPUET1 در مکان آنزیم‌های محدودکننده BamH1 و EcoR1کلون شد و به داخل سلول میزبان BL21plsS انتقال یافت. همچنین جهت ایجادوکتور یوکاریوتی،pcROP1 در pcDNA3 در مکان‌های Hind111 و ٍEcoR1 ساب کلون شد و نتایج با هضم آنزیمی و توالی یابی بررسی شد. حال این آنتی‌ژن‌نوترکیب با IgM و IgGELISA پوشانده شد. نتایج:یک قطعه 757 جفت‌بازی جداسازی شد و آنالیز توالی یک همولوژی در حد 96 درصد را با توالی ژن در سایت No. M71274.)Gene Bank)نشان داد.نتایج الایزا نشان داد IgMELISA ROP1 با بیشترین تعداد نمونه‌های IgM مثبت واکنش می‌دهد. نتیجه‌گیری:آنتی‌ژن‌نوترکیب ROP1 در یک تست IgM Rec-ELISA می‌تواند جایگزین آنتی‌ژن تاکی زوئیت در تست‌های سرولوژیکی IgM و IgG شود. Introduction:Toxoplasma gondii is a ubiquitous obligate intracellular parasite with a relatively broad host range infecting both mammals and birds. Toxoplasma proteins are strong antigens that can begin strong immune reactions, among which Rhoptry protein 1 (ROP1) can be named discharging from rhoptry cell-organ. ROP1 is regarded as a competitor for recombinant vaccines against toxoplasmosis. Therefore, the main objective of the current study was to evaluate the cloning and expression of ROP1 Toxoplasma gondii in a cloning vector as well as to create this recombinant antigen in order to be applied for later uses. Methods:Genomic DNA of Toxoplasma gondii was removed and reproduced by PCR, then the PCR product was cloned into the EcoR1 and BamH1 sites of cloning vector, pUET1, and transformed into Escherichia coli BL21 plysS strain. Moreover, pcROP1 was sub-cloned into the HindIII and EcoRI sites of the pcDNA3 in order to produce recombining eukaryotic declaration vector. The cloned ROP1 was verified by PCR, limitation enzymes (HindIII and BglΙ) digestion and nucleotide sequencing. Then, this recombinant antigen was covered applying IgM and ELISAIgG. Results:The study results demonstrated that a fragment of 757 bp was separated. In addition, nucleotide sequence analysis of the ROP1 cloned in pUET1vector revealed high homology (96%) with RH strain Gene Bank Accession (No. M71274). Conclusion:The recombinant ROP1 antigen in an IgM Rec-ELISA test can be replaced with the tachyzoite antigen in IgG and IgM serologic tests. توکسوپلاسما گوندیی, آنتی‌ژن نوترکیب, ژنROP1 Recombinant antigen, ROP1, Toxoplasma gondii 2083 2095 http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1957-2&slc_lang=fa&sid=1 F Keshavarzi فاطمه کشاورزی gol.keshavarzi@gmail.com Yes Islamic Azad University of Pharmaceutical Sciences Branch گروه زیست شناسی ، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد سنندج، سنندج،کردستان، ایران