fa جداسازی ملیتین از زهر زنبور عسل بومی ایران و بررسی اثر آن بر تکثیر سلول‌های سرطانی دهانه رحم - رده HeLa بیوشیمی Biochemistry پژوهشي Original article مقدمه: سرطان دهانه رحم دومین سرطان شایع در کشورهای در حال توسعه می‌باشد. با توجه به اینکه روش‌های متداول درمان به اندازه کافی مؤثر نبوده و با عوارض جانبی همراه است، جستجوی راه‌های درمانی جدید با استفاده از ترکیبات طبیعی اهمیت ویژه‌ای دارد. این مطالعه با هدف بررسی اثر ملیتین مستخرج از زهر زنبور عسل بر تکثیر سلول‌های سرطانی دهانه رحم- رده HeLa انجام پذیرفت. روش بررسی: ملیتین با استفاده از روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا- فاز معکوس (RP-HPLC) از زهر زنبور عسل بومی ایران استخراج گردید. جهت اطمینان از فعالیت بیولوژیک ملیتین، تست همولیتیک بر روی گلبول‌های قرمز انجام گردید. در این مطالعه اثر مهاری ملیتین بر تکثیر و میزان حیات (Viability) سلول‌های سرطانی رده HeLa بررسی گردید. به این منظور رده سلولی HeLa در پلیت 96- خانه کشت داده شد. سپس در مجاورت غلظت‌های مختلف ملیتین با زمان‌های 12 و 24 ساعت تیمار گردید. در انتها حیات سلول‌ها با روش MTT در طول موج 540 نانومتر تعیین گردید. نتایج: غلظتی از ملیتین که فعالیت همولیتیک 50 درصدی از خود نشان داد، µg/ml5/0=50HD شد، در حالی که در مجاورت سرم جنین گاوی (FBS) فعالیت همولیتیک به µg/ml2=50HD کاهش یافت. میزان زنده بودن 50 درصدی سلول‌های سرطانی در تیمار با ملیتین با توجه به تست MTT با زمان انکوباسیون 12 ساعت، µg/ml1 به دست آمد. نتیجه‌گیری: ملیتین دارای فعالیت همولیتیک قابل توجهی می‌باشد و از نظر بیولوژیکی بسیار فعال است. نتایج تست MTT نشان داد که ملیتین در شرایط وابسته به غلظت و زمان انکوباسیون، تکثیر سلول‌های HeLa را مهار می‌کند، لذا مطالعات دیگر جهت بررسی مکانیسم اثر ملیتین پیشنهاد می‌گردد. Introduction: Cervical cancer is the second prevalent cancer in developing countries and the sixth prevalent cancer in USA. Since conventional treatment methods are associated with detrimental side effects, searching for new drugs using natural ingredients is very important. Previous studies have shown that melittin (main component of honey bee venom) has anticancer properties along with the effect on cell membrane and activation of apoptosis. In this study, inhibitory effects of melittin on the viability and proliferation of cervical cancer cell line (HeLa) was investigated. Methods: Melittin was purified from honeybee venom using reversed-phase HPLC method. Then, biological activity of melittin was examined by hemolytic activity analysis on the red blood cells. In order to investigate whether melittin inhibits proliferation of HeLa cell, MTT assay was performed. HeLa cells were plated in a 96-well plate and treated with serially diluted concentrations of melittin for 12 and 24 hours. The viability of the cells was measured via MTT assay at 540nm. Results: Melittin showed a strong hemolytic activity (HD50=0.5 µg/ml) which can be reduced by FBS(HD50=2 µg/ml). Results of MTT assay indicated that melittin shows cytotoxic effect on cervical cancer cells with IC50 = 1.2 ug/ml at 12h incubation period. Conclusion: In this study, biological activity of melittin and inhibitory effect of FBS on hemolysis were determined via hemolytic activity analysis. MTT assay indicated that melittin induced cytotoxic effects in a dose dependent manner on cervical cancer cells and it also revealed dependence on incubation time as well. ملیتین، سرطان دهانه رحم، رده سلولی HeLa، MTT Cervical cancer; HeLa cell line; Melittin; MTT 226 238 http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1148-2&slc_lang=fa&sid=1 H Zarinnahad حنانه زرین نهاد No A Mahmoodzadeh امیر محمودزاده No K Pooshang Bagheri کامران پوشنگ باقری No M Mahdavi مهدی مهدوی No D Shahbazzadeh دلاور شهباززاده No A Moradi علی مرادی Yes