مقدمه: پروتئینهای غیرفعالکننده گیاهی (RIP) به عنوان آنزیمهای N-glycosidase عمل میکنند و به وسیله چندین عضو از خانواده Caryophyllaceae مانند Saponaria Officinalis تولید میشوند. ایزوفرمهای مختلفی از RIPها به وسیلهSaponaria Officinalis بیان میشوند. ایزوفرم SO۶، آدنین ۴۳۲۴ را در توالی حفاظتشده GAGA در چهار لوپ ۲۸SrRNA را دپورینه کرده و سنتز پروتئین را مختل میکند. هدف این مطالعه بیان ایزوفرم SO۶ در باکتری E.coli و بررسی تیترآنتیبادی آن در رتهای آزمایشگاهی است.
روش بررسی: در این مطالعه تجربی ژن SO۶ سنتز شده از پلاسمید pUC۵۷-SO۶ نوترکیب به وسیله آنزیمهای محدود کننده BamHI و SalI جدا و در وکتور بیانی pET۲۸a(+) زیرهمسانهسازی شد. بیان پروتئین نوترکیب با IPTG القا گردید. پروتئین SO۶ نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص گردید. به منظور تایید پروتئین نوترکیب western blotting انجام گرفت. رَتها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده واکسینه شدند و تیتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت.
نتایج: واکنش PCR و هضم آنزیمی، زیرهمسانهسازی ژن SO۶ را در وکتور بیانی pET۲۸a(+) تائید کرد. یک باند پروتئینی ۲۹,۵kDa در SDS-PAGE بیان بالای پروتئین نوترکیب را نشان داد. آنتیبادی پلی کلونال، SO۶ را شناسایی کرد. تست ELISA تیتر آنتیبادی قابلتوجهی را بعد از تزریق پروتئین در گروههای تست در مقایسه با گروههای کنترل تائید کرد.
نتیجهگیری: از آنجایی که آنتیژن SO۶ نوترکیب تخلیص شده ایمونوژن است، این آنتیژن میتواند برای تحقیقات ضد سرطانی و کاندید واکسن استفاده شود.