دوره 33، شماره 2 - ( اردیبهشت 1404 )
جلد 33 شماره 2 صفحات 8717-8705 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Hajizadeh M, Jafari Kakhki A, Nabavinia M, Nabavinia M. Cloning and Optimization of Formate Dehydrogenase Gene Expression in E. COLI. JSSU 2025; 33 (2) :8705-8717
URL: http://jssu.ssu.ac.ir/article-1-6174-fa.html
URL: http://jssu.ssu.ac.ir/article-1-6174-fa.html
حاجی زاده محمدرضا، جعفری کاخکی امیرمحمد، نبوی نیا محبوبه، نبوی نیا مریم. کلونینگ و بهینه‌سازی بیان ژن آنزیم فورمات دهیدروژناز در اشرشیا‌کلی. مجله علمي پژوهشي دانشگاه علوم پزشكي شهید صدوقی يزد. 1404; 33 (2) :8705-8717
چکیده: (16 مشاهده)
مقدمه: افزایش گازهای گلخانه ای و گرم شدن زمین باعث توجه جهانی در اصلاح این پدیده گردیده است. آنزیم فورمات دهیدروژناز قادر به کاهش CO2 در تبدیل آن به فورمات بوده که توسط آنزیم الکل دهیدروژناز به متانول تبدیل می‌شود. هم‌چنین این آنزیم در فرایند تولید دارو ساکساگلیپتین می تواند مورد استفاده قرار گیرد. هدف این تحقیق ارزیـابی اثـر غلظت‌های مختلف القا کننده (Isopropyl ß-D-1-thiogalactopyranoside) IPGT، زمان القا و محیط کشت بر تولید آنزیم فورمات دهیدروژناز می‌باشد.
روش بررسی: این مطالعه یک مطالعه آزمایشگاهی است. در ابتدا پرایمرهای اختصاصی بـه منظـور تکثیـر قطعه ژنی طراحی گردید. قطعه ژنی توـط پرایمرهـای اختصاصـی و روش PCR تکثیر گردید. ژن آنزیم فورمات دهیدروژناز داخل وکتور pET28b وارد و به داخل باکتریE.coli انتقال یافت. به منظور بهینه‌سازی بیان پروتئین طراحی آزمایش با روش تاکوچی انجام و تاثیر دما، غلظت القاکننده و نوع محیط کشت بر میزان بیان پروتئین در دو سطح متفاوت، بررسی شد.
نتایج: نتایج Colony-PCR تکثیر ژن آنزیم فورمات دهیدروژناز در باکتری E.coli را تایید کرد. بررسی اثر زمان القا کننده و غلظـت IPTG نشـان داد زمان وغلظت القاگر اثر منفی بر تولید دارند. بیشترین میزان تولید پروتئین نوترکیب در 24 ساعت بعد از القا⸲ دمای 25 درجه سانتی‌گراد، غلظت 1/0 IPTG و حضور سوربیتول می‌باشد. در بررسی اثر محیط کشت بر بیان پروتئین محیط کشت LB بهترین محیط بود.
نتیجه‌گیری: افزایش غلظت IPTG تاثیری در افزایش بیان آنزیم نداشت، در نتیجه می‌توان با غلظت‌های کم IPTG پروتئین را تولید کرد که مقرون به صرفه می‌باشد هم‌چنین کاهش زمان موجب افزایش بیان پروتئین شود. محـیط کشت (Luriabroth) LB همراه سوربیتول مناسـب‌ترین محـیط القـای بیان آنزیم فورمات دهیدروژناز است.
روش بررسی: این مطالعه یک مطالعه آزمایشگاهی است. در ابتدا پرایمرهای اختصاصی بـه منظـور تکثیـر قطعه ژنی طراحی گردید. قطعه ژنی توـط پرایمرهـای اختصاصـی و روش PCR تکثیر گردید. ژن آنزیم فورمات دهیدروژناز داخل وکتور pET28b وارد و به داخل باکتریE.coli انتقال یافت. به منظور بهینه‌سازی بیان پروتئین طراحی آزمایش با روش تاکوچی انجام و تاثیر دما، غلظت القاکننده و نوع محیط کشت بر میزان بیان پروتئین در دو سطح متفاوت، بررسی شد.
نتایج: نتایج Colony-PCR تکثیر ژن آنزیم فورمات دهیدروژناز در باکتری E.coli را تایید کرد. بررسی اثر زمان القا کننده و غلظـت IPTG نشـان داد زمان وغلظت القاگر اثر منفی بر تولید دارند. بیشترین میزان تولید پروتئین نوترکیب در 24 ساعت بعد از القا⸲ دمای 25 درجه سانتی‌گراد، غلظت 1/0 IPTG و حضور سوربیتول می‌باشد. در بررسی اثر محیط کشت بر بیان پروتئین محیط کشت LB بهترین محیط بود.
نتیجه‌گیری: افزایش غلظت IPTG تاثیری در افزایش بیان آنزیم نداشت، در نتیجه می‌توان با غلظت‌های کم IPTG پروتئین را تولید کرد که مقرون به صرفه می‌باشد هم‌چنین کاهش زمان موجب افزایش بیان پروتئین شود. محـیط کشت (Luriabroth) LB همراه سوربیتول مناسـب‌ترین محـیط القـای بیان آنزیم فورمات دهیدروژناز است.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
میکروبیولوژی
دریافت: 1402/11/27 | پذیرش: 1403/3/9 | انتشار: 1404/2/15
دریافت: 1402/11/27 | پذیرش: 1403/3/9 | انتشار: 1404/2/15
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
