The Journal of Shahid Sadoughi University of Medical Sciences

fa حذف بیان پروتئین دیستروفین با استفاده از تداخل در پردازش mRNA Rescue of Dystrophin Protein Expression by Interfering of mRNA Processing بیوشیمی Biochemistry پژوهشي Original article <div style="text-align: justify;">مقدمه: پرش اگزونی (Exon Skipping) به‌عنوان یکی از امیدبخش‌ترین رویکردهای درمانی برای دیستروفی عضلانی دوشن (DMD) مطرح شده است. این استراتژی با بازسازی چهارچوب خوانش ژن دیستروفین، امکان تولید پروتئین کوتاه‌شده اما عملکردی را فراهم می‌کند. استفاده از ناقل‌های ویروسی AAV برای انتقال پایدار توالی‌های القاکننده exon skipping می‌تواند کارایی این روش را به‌طور قابل‌توجهی افزایش دهد. روش بررسی: در این مطالعه، یک وکتور مبتنی بر AAV حاوی RNA U7 مهندسی‌شده برای القای حذف اگزون 51 ژن دیستروفین طراحی و تولید شد. برای تسهیل و تسریع فرایند ساخت، از فناوری ligase independent cloning (LIC) استفاده گردید. ذرات ویروسی تولیدشده برای آلوده‌سازی سلول‌های میوبلاست انسانی به‌کار رفتند و کارایی القای exon skipping با استفاده از RT-PCR و میزان بیان پروتئین دیستروفین با وسترن بلات ارزیابی شد. نتایج: نتایج RT-PCR نشان‌دهنده حذف مؤثر اگزون 51 از mRNA بالغ ژن دیستروفین در سلول‌های تیمار شده بود. همچنین، افزایش بیان پروتئین دیستروفین در سطح پروتئینی در مقایسه با نمونه‌های کنترل مشاهده شد که بیانگر بازسازی چهارچوب خوانش و ترجمه موفق ترانسکریپت اصلاح‌شده است. نتیجه‌گیری: یافته‌های این مطالعه نشان می‌دهد که وکتور AAV مهندسی‌شده مبتنی بر U7 قادر است به‌طور مؤثر exon skipping اگزون 51 را القا کند. استفاده از فناوری LIC امکان توسعه سریع و انعطاف‌پذیر وکتورهای exon skipping هدف‌گیرنده اگزون‌های مختلف ژن دیستروفین را فراهم می‌کند. این پلتفرم می‌تواند به‌عنوان یک راهبرد مناسب در پزشکی شخصی و درمان بخش قابل‌توجهی از بیماران مبتلا به DMD مورد استفاده قرار گیرد.  </div> <div style="text-align: justify;">Introduction: Exon skipping has emerged as one of the most promising therapeutic strategies for Duchenne muscular dystrophy (DMD), because it restores the correct reading frame of dystrophin mRNA without directly modifying the genome. Delivery systems based on adeno-associated virus (AAV) enable long-term expression of exon-skipping components and improve therapeutic efficiency. Methods: In this study, an AAV-based vector encoding a modified U7 snRNA designed to induce skipping of dystrophin exon 51 was constructed using a ligase-independent cloning (LIC) strategy. Recombinant AAV particles were produced and used to transduce immortalized human myoblasts. Exon 51 skipping efficiency was evaluated by RT-PCR, and dystrophin protein expression was assessed by western blotting. Results: RT-PCR findings demonstrated effective exon 51 skipping in the treated cells, producing a shortened dystrophin mRNA transcript. Western blot analysis revealed increased expression of a truncated but functional dystrophin protein in AAV-treated myoblasts compared to controls. Conclusion: These results indicate that the engineered AAV-U7 system effectively induces exon 51 skipping and restores dystrophin expression at the protein level. The LIC-based platform enables rapid generation of personalized exon-skipping vectors and represents a versatile and scalable approach for the development of RNA-based gene therapies for DMD.  </div> دیستروفین, تداخل ژنی, پردازش Dystrophin, gene skipping, mRNA processing. 10011 10023 http://jssu.ssu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-905-4&slc_lang=fa&sid=1 Majid Mojarrad مجید مجرد mahidmojarrad13@gmail.com 0000-0001-8742-2844 No Department of Medical Genetics, School of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran. گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران. Atieh Eslahi عطیه اصلاحی atiye.eslahi69@gmail.com 0000-0002-6934-4851 No Department of Medical Genetics, School of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran. گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران. Hossein Tanipur حسین تنی پور mahidmojrrad13@gmail.com 0000-0003-4065-0772 No Department of Medical Genetics, School of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran. گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، ، مشهد، ایران. Javad Zavar Reza جواد زواررضا jzavar@gmail.com 0000-0003-4065-0772 Yes Department of clinical Biochemistry, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. بیوشیمی بالینی،دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران.